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Q-PCR vs 快筛卡 优劣分析

分子诊断近几年在人医检测上的迅速扩张与发展,让人医检测走入精准医疗的时代,人类的伴侣动物们当然也开始朝向这方向发展,而更精确的检测报告,确实能大幅度的提升临床医师诊治效果;国内兽医领域针对病毒及寄生虫的检测技术仍以快筛卡为主流,虽然已有分子诊断技术,不过尚不普及,下面列出各检测技术的优缺点:

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兽丘分子诊断采Q-PCR技术为标准规范

技术对比
一、快筛卡:       

专业名称为胶体金免疫层析卡,免疫胶体金技术是指以胶体金为标记物,应用于免疫组织化学及免疫分析的一种免疫学技术。

亚博体育官方平台抗原试纸一般采用双抗体夹心方式的免疫胶体金层析技术,属于一步式固相膜反应。试纸被滴加样品溶液后,溶液中的抗原随溶液爬行至结合垫处,与其中的胶体金标记的一抗反应形成红色的抗原抗体复合物,然后继续层析移动向前。在观察窗口的检测线(T)处,红色免疫复合物中的抗原被此处预先包被二抗捕获并截留下来,随着红色复合物截留量增多,逐渐形成一条红线,根据红色T线的出现即可判定样品溶液为阳性。如果样品中没有抗原,则不形成免疫抗原抗体复合物,流过T处,不发生捕获截留,T处保持白色,判定为阴性,如图所示:

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缺点:

1、假阳性和假阴性的结果多
2
、检测标定为蛋白,需要等到感染中期后才能检测

原因:

快筛卡的检测标的是抗原(蛋白),在感染初期,病毒量未大量繁殖,抗原含量较低,快筛卡检测显色不明显,肉眼判读会判断为阴性而造成假阴性结果;而当接受药物治疗后,虽然病毒已被清除,但是抗原(蛋白)还会在体内存在,进行快筛卡检测会造成假阳性结果。

 

二、PCR

PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术,能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。在扩增反应结束之后,通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析,也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析。无论定性或者定量分析,分析的都是 PCR 终产物。可应用于遗传性疾病的诊断,传染病的诊断,癌基因检测,基因克隆和引入基因点突变,基因融合等。

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PCR原理图

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电泳分析图

MDNA Marker146为阳性检体;235为阴性检体

缺点:

需取出扩增产物进行再进行电泳分析,容易造成污染

原因:

普通PCR的过程只是将核酸在体外进行扩增放大,需要结合凝胶电泳仪,取出扩增产物再进行电泳分析,电泳条带的判读依赖肉眼观察,主观意识较强。

 

三、Q-PCR

 Q-PCR( Quantitative real time polymerase chainreaction) 即实时荧光定量PCR,是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和染料类两种。探针类主要以TaqMan探针为主,染料类主要以SYBR Green Ⅰ为主。

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缺点:

成本高,需要价格昂贵的设备和试剂

原因:

Q-PCR需要专用的实时荧光定量PCR仪,而目前市面上的实时荧光定量PCR仪器价格昂贵。

 

注释1Q-PCR的灵敏度比PCR的灵敏度高100~1000倍。参考文献如下:

1、钟岸,蔡蓁,王毅. 实时荧光PCR和普通PCR方法检测病原微生物的灵敏度比较. 海南医学,201324131956-1958

2、陈宣男,全首祯. NDM1基因常规PCR与荧光定量PCR检测方法的建立及其检测结果比较. 吉林大学学报(医学版),201303.

3、雷建华, 杨旭, & 黄力. 2003. 荧光定量PCR与常规PCR检测血清乙型肝炎病毒的对比观察. 临床内科杂志, (01), 20–21.

 

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